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实验服务
常见问题
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蛋白提取操作时的注意事项
发布时间:2015-02-2

1.  避免蛋白降解

(1)总体规则:蛋白酶普遍存在,在提取蛋白质的步骤中,早些抑制,经常抑制 分装蛋白溶液,储存于不同的温度和不同的缓冲液中,测蛋白活性,找出最适储存条件;

(2)冷藏,并加入稳定剂。这些稳定剂一般都能充分保持蛋白的 生物 学活性;

(3)将蛋白溶液储于50%(V/V)的甘油或悬于硫酸铵(3.2M)中,避免冻存;

(4)冰结晶会造成物理剪切及蛋白变性;

(5)避免酶的反复冻融,如果酶需要冻存,分装成小管后冻存。

2.  蛋白质的储存

(1)蛋白样品在液氮中速冻,拿出后加入10-20%的甘油,长期储存 ;

(2)整个实验过程中,都要将蛋白样品置于冰上;

(3)从母管中吸取不同的蛋白时,都要用新鲜的枪头 ;

(4)不要将未用的溶液倒回母管 ;

(5)戴手套操作,避免蛋白交叉污染,或是 蛋白酶 的污染;

(6)避免剧烈的震荡,避免溶液中混入蛋白变性剂 ;

(7)实验的过程中应避免灰尘进入,灰尘包含60%的肌氨酸 。

3.  操作过程中

(1)操作时总是小体积小量的操作,避免污染,并且动作要快下表为常见的 蛋白酶 类型及相对应的抑制剂;

(2)此类蛋白酶在活性中心包含丝氨酸和组氨酸;

(3)此类蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸(巯基,-SH - );

(4)此类蛋白酶在活性中心包含金属离子(如:Zn 2+ ,Ca 2+ ,Mn 2+ );

(5)类蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。


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