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分子实验  
实时荧光定量PCR
发布时间:2015-01-26
实时荧光定量PCR

一、服务介绍

实时PCRreal-time PCR),属于定量PCRQ-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。

二、实验原理

实时PCR的定量使用荧光色素,目前有二种方法。一种是在ds DNA中插入特异的荧光色素,例如SYBR Green荧光染料;另一种使用一种能与增幅DNA序列中特定寡核酸序列相结合的一种荧光探针(probe),如Taqman探针。两种方法原理不同。SYBR Green荧光染料游离时不发光,当反应体系中存在双链DNA时,SYBR Green与双链DNA结合,此时才发光。Taqman探针带有一个荧光基团和一个淬灭基团,荧光基团连接在探针的5’末端,而淬灭基团则在3’末端。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5′-3′外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,此时荧光基团发出的荧光信号可以被检测到。real time PCR 与 reverse transcription PCR 相结合,能用微量的RNA来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT-PCR的组合又被称之为定量RT-PCR(quantitative RT-PCR)

三、实验流程

  1.提取RNA;

  2.DNAse I 消化样品RNA 中的DNA;

  3.RNA琼脂糖凝胶电泳

  4.RNA反转录为cDNA;

  5.cDNA与引物质量检测;

  6.利用相对定量的方法分析目的基因表达量的情况;

  7.定量 PCR检测;

  8.分析扩增曲线和溶解曲线

四、服务说明

1.客户提供:

   模板RNA或相关材料等,试剂盒(可代购)。  

2.公司提供:

   转录成功的DNA;电泳图。

3.实验周期:

   3天到1周。

五、质量承诺

提供足量DNA,清晰的图片,及DNA的分析研究和检测鉴定报告。


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